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染料法PCR試劑盒所使用的樣本應(yīng)滿足以下要求
點擊次數(shù):669 更新時間:2022-01-10
  染料法PCR試劑盒利用離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜提取豬偽狂犬病毒DNA,以此為模板,在特異引物和TaqDNA聚合酶的作用下,經(jīng)高溫變性,低溫退火、中溫延伸的循環(huán),使特異的DNA的片段拷貝數(shù)放大一倍。經(jīng)過30次循環(huán),使擴增的DNA的片段放大數(shù)百萬倍。將擴增的DNA的片段進行電泳,經(jīng)染色后在紫外燈照射下,肉眼可見DNA的片段的擴增帶,進而判斷待檢樣本中是否含有豬偽狂犬病毒。
  染料法PCR試劑盒所使用的樣本應(yīng)滿足以下要求:
  1、血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
  2、血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。
  3、尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
  4、細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
  5、組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
  6、標(biāo)本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
  7、不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
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